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能够影响大肠杆菌感受态细胞转化率因素之一
点击次数:106 发布时间:2019-08-26 返回
  影响大肠杆菌感受态细胞转化率因素之一
 
  细胞生长状态和密度:不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌,zui好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好,可通过监测培养液的OD600来控制。DH5α菌株的OD600为0.5?时,细胞密度在5×107个/ml左右(不同的菌株情况有所不同),这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化效率。
 
  要知道感受态是指受体细胞易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态。感受态由受体细胞的遗传性状所决定的,受菌龄、外界环境因子的影响。cAMP可提高感受态水平一万倍,而Ca2+存在也可大大促进转化的作用。新鲜,幼嫩的细胞是选择做感受态细胞的佳材料。
 
  大肠杆菌感受态细胞关于感受态种类分享
 
  DH5α:实验室最常用的感受态细胞,转化效率高,可用于蓝白斑筛选
 
  XL2-Blue:适用于大质粒DNA和重组产物的转化,降低片段大小的偏爱性,多用于文库构建
 
  TG1:生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株之一,主要用于噬菌体展示,也可用于普通质粒构建
 
  JM108:扩繁质粒产量大,纯度高,且质量稳定,特别是超螺旋质粒比例较高,超螺旋质粒所占比例一般>90%,非常适合后续的动物细胞转染实验
 
  注意事项
 
  1、为制备转化效率较高的感受态细胞,可将保种液经划线和二次培养以后用于制作感受态细胞。
 
  2、注意挑取LB固体培养基上湿润,圆滑的克隆,以防挑取杂菌。
 
  3、进行二次培养的时候,摇床转速应选择较低转速,空载转速在100-150转/min左右。
 
  4、制作感受态的过程中尽量冰上操作,操作的动作尽量轻柔,稳健;试验中所用的试剂,转子,离心机需要提前预冷。
 
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