博客来棋牌下载

新闻动态博客来棋牌下载 > 新闻动态 > 操作CMbio JM109感受态细胞你做到这些了吗?
操作CMbio JM109感受态细胞你做到这些了吗?
点击次数:98 发布时间:2019-06-19 返回
操作CMbio JM109感受态细胞你做到这些了吗?
   CMbio JM109感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。
  JM109感受态细胞是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA 的化学转化。使用pUC19 质粒检测,转化效率可达10 8 ,-70 ℃ 保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用,降低了实验的成本。质量稳定,使用方便,质优价廉。 recA1和endA1突变阻止对克隆DNA的修饰或对宿主菌染色DNA的重组,提高纯化质粒的产量和质量。
  感受态细菌细胞的转化采用氯化钙的方法。不含有质粒的大肠杆菌菌株在室温下使其解冻并加入40mL S.O.C 的液体培养基。在37 ℃培养1h , 然后将其转移到37 ℃摇床上以200r /min 速度培养2 ~3h, 直到OD600 达到0.2 ~ 0.4。不同细菌菌株的适宜OD600 是不同的。在4 ℃下以8000r /min 的速度离心1min, 然后用一半体积(20 mL)已灭菌的预冷的TB(CaCl2)溶液进行悬浮, 并在冰上保存25 min。如上进行另一次离心后,所得到的细胞沉淀用十分之一体积(4mL)预冷的TB (CaCl2)溶液进行悬浮获得感受态细胞。感受态细胞可于4 ℃下保存3d。
  JM109感受态细胞注意事项:
  感受态细胞(competent cell):理化方法诱导细胞,使其处于适摄取和容纳外来DNA的生理状态。主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大,直观的说,使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性,这种孔洞会被细胞自身所修复。
  CMbio 感受态细胞在冰上融化。
  混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
  转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少用于涂板的菌量。
 
QQ在线客服
电话咨询
  • 13770640776
广东快乐十分注册 华夏棋牌 广东快乐十分技巧 广东11选5APP下载 广东11选5分布走势图 广东11选5开奖结果 广东11选5APP下载 广东快乐十分开奖直播 广东快乐十分网 广东11选5分布走势图