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Y187感受态细胞说明书
点击次数:74      发布时间:2019-10-07

Y187酵母感受态细胞基因型:

MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101,  trp 1-901, leu 2-3, 112, gal4Δ, met, gal80Δ, URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ, MEL1


Y187酵母感受态细胞简要说明:
Y187菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母单杂,双杂实验用菌株,MATα型,可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株(Y2HGoldAH109等)通过mating操作进行筛库试验。
Transformation  marker: trp1, leu2,报告基因为:lacZ, MEL1。
Y187 -GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用:PGBKT7PGADT7
质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1,用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N1~ 174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白;
Y187酵母感受态细胞操作说明:

  1.  取100 μl冰上融化的Y187感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5ug,Carrier DNA(95-1005min,快速冰浴,重复一次)10 ul ,PEG/LiAc  500ul并吸打几次混匀,30度水浴30 分钟(15 min时翻转6-8次混匀)。
  2.  将管放42度水浴15min  (7.5 min时翻转6-8次混匀)。 

3. 5000 rpm 离心 40s 弃上清,ddH2O 400ul 重悬,离心 30s 弃上清。
4. ddH2O 50ul重悬,涂板,29℃培养48-96h。

上海淳麦生物科技有限公司  感受态细胞培养专家  4006815880

 

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