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EHA101农杆菌感受态细胞
点击次数:306      发布时间:2019-06-23

EHA101农杆菌感受态细胞

EHA101 Chemically Competent Cell

产品编码:                        保存条件: -80℃   
产品规格:

EHA10120×100 μl
pK7WGF2 (control vector)10 ng/μl            10 μl

                
EHA101农杆菌感受态细胞基因型:
C58 (rif R) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (kanR, strepR) Nopaline
EHA101农杆菌感受态细胞简要说明:
 EHA101菌株为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101 (pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)
pEHA101 (pTiBo542DT-DNA) Ti质粒含有筛选标签:strepkan,赋予EHA101菌株链霉素抗性和卡那霉素抗性,适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作,经pK7WGF2质粒检测转化效率可达10cfu/μg DNA

EHA101农杆菌感受态细胞操作说明:

  1.  -80℃保存的农杆菌感受态于冰上待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。
  2.  100 μl  感受态加1 μg(体积不大于10 μl)质粒DNA,用手管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、28℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
  3.  加入700 μl无抗生素的LBYEB液体培养基,于28℃,200rpm振荡培养2~3小时。

4. 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LBYEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
EHA101农杆菌感受态细胞注意事项:

  1.  加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
  2.  混入质粒时应轻柔操作,转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
  3.  利福平浓度不应高于25 μg/ml,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板同时含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。

4。 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失,但链霉素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素,Ti质粒丢失的概率极低 (可以忽略)

上海淳麦生物科技有限公司  感受态细胞培养专家  4006815880

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